默克限制性內(nèi)切酶是一種能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列，并在特定位置切割DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類酶，簡(jiǎn)稱限制酶。不同的限制性內(nèi)切酶會(huì)識(shí)別不同的DNA序列，它可以在識(shí)別序列內(nèi)或距識(shí)別序列不遠(yuǎn)的位置處切割DNA，酶切之后會(huì)形成不同類型的產(chǎn)物。
默克限制性內(nèi)切酶常用于分子克隆實(shí)驗(yàn)中。但除了克隆，它還可以應(yīng)用于疫苗研發(fā)生產(chǎn)、基因測(cè)序、SNP鑒定、ddPCR等領(lǐng)域。限制性內(nèi)切酶的命名主要是根據(jù)細(xì)菌的屬名、種名、菌株或血清型、發(fā)現(xiàn)的順序而定。
在使用商品化的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行雙酶切時(shí)，一定要注意二者共用的Buffer，選錯(cuò)了，試驗(yàn)就會(huì)面臨失敗。膠回收時(shí)，一定要使用適用于膠回收的核酸染料。
每一個(gè)限制性內(nèi)切酶就是一把手術(shù)刀，它們能夠識(shí)別特定的堿基序列準(zhǔn)確切割。在使用這些酶切割后，會(huì)產(chǎn)生平末端和粘性末端。根據(jù)自己的需要做一些設(shè)計(jì)，一般來(lái)說(shuō)，我們使用粘性末端連接多些。
在分子克隆試驗(yàn)中，我們常用II型的限制性內(nèi)切酶，比如BamHI、HindIII、EcoRI等等。利用它們做單酶切或雙酶切，構(gòu)建重組質(zhì)粒。一般酶切為37℃，3－4小時(shí)。酶切時(shí)間過(guò)短會(huì)造成切開的效率不高，過(guò)長(zhǎng)會(huì)造成非特異性切割。有些酶具有典型的星號(hào)活性，即在一定條件下出現(xiàn)亂切。
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